發(fā)布時(shí)間: 2021-08-25 點(diǎn)擊次數: 788次
酶elisa試劑盒應快速準確地使用,時(shí)間應控制在15分鐘以?xún)?。如果樣品量大,可分幾次完成?shí)驗,或將樣品溶液置于預混合微孔板中,用多道移液管快速移走。吸收相同試劑后,可將試劑倒入V形取樣罐中,并用多通道移液管快速取出。將一次性PE手套放在取樣罐上,然后倒入試劑進(jìn)行檢測,這樣可以保證試劑的完整性,不會(huì )被污染。更換取樣罐中的一次性手套后,可使用下一種試劑。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)作為主要的生物技術(shù),廣泛應用于樣品抗原和抗體的免疫檢測,已成為一種醫學(xué)診斷工具?;驹硎窃跍y定過(guò)程中,被測樣品與固相載體表面的抗原或抗體反應,通過(guò)洗滌將固相載體上形成的抗原抗體復合物與溶液中的其他物質(zhì)分離,然后加入酶標記的抗原或抗體,它也通過(guò)反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與樣品中待檢測目標物質(zhì)的量直接相關(guān),因此可以根據顏色的深度進(jìn)行定性或定量分析。
酶elisa試劑盒在使用時(shí)常采用以下這些方法:
1)直接法:將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標一抗,即可測定抗原總量。該方法步驟短,無(wú)需使用二級抗體,避免了相互作用。
2)間接法:間接法是檢測抗體的常用方法。其原理是利用酶標抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)結合固相抗原檢測待測抗體。
3)雙抗體夾心法:分別使用針對抗原分子上兩種不同抗原決定簇的單克隆抗體作為固相捕獲抗體和酶標記檢測抗體。它適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,如血漿中的細胞因子,但不適用于測定半抗原和小分子單價(jià)抗原。同樣,還有一種雙抗原夾心法來(lái)測量抗體。
4)競爭法:由于小分子抗原或半抗體導致夾心法缺少兩個(gè)以上位點(diǎn),不能采用雙抗體夾心法測定,可采用競爭法模式。當難以去除抗原材料中的干擾物質(zhì)或獲得足夠純化的抗原時(shí),該方法可用于檢測特異性抗體。
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